




ros也就是活性氧(reactive oxygen species,ros)指来源于氧的自由基和非自由基。ros在细胞生命,应激和si亡中具介导作用,并且不同浓度的ros在其中起着截然不同的作用,从而导致细胞---的不同。因此对ros的浓度或相对水平进行---的测量非常有---。
实验仪器和材料
细胞培养基
胎牛xue清
青mei素/链mei素
胰酶
pbs
dmso
活性氧(ros)试剂盒
血球计数板
co2培养箱
倒置荧光显微镜
实验步骤1、细胞传代培养:当细胞长至80-90%时,去除培养基,加入pbs洗1-2次,去除pbs后,加入1ml胰酶---1-3min后,加入3ml完全培养基中和胰酶终止---,将---的细胞转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min。倒掉上清后,加入3ml培养基重悬细胞,1:3传代至培养皿中培养。
2、将长到培养皿80%-90%的内皮细胞用胰酶---下来,1000rpm离心,去除上清,加入完全培养基重悬细胞,将细胞分别种在6孔板中,每孔种1×106个细胞。3、待细胞贴壁后,使用不同的含药xue清的培养基培养细胞。3、待细胞贴壁后,使用不同的含药xue清的培养基培养细胞。4、48h后,加入dcfh-da于培养基中,稀释倍数为1:1000。5、孵育1h后,直接将细胞置于荧光显微镜下拍照。
实验结果
对于科学研究越来越重视,医生以及科研---可以获得更多相关实验课题的资助,国内的科研环境也是越来越好,动物实验课题外包,对于科研实验以及科研---自身素质要求也越来越高,碍于很多科研---工作单位基础设施不完善、---工相关教学工作任务繁重,无暇顾及自身科研课题,实验外包行业由此诞生。对于国内的---来说,实验外包行业可能是一个新兴的行业,对于国外的科研---,早已屡见不鲜,在五六十年代,实验外包行业在国外已经兴起。我国的实验外包行业虽然起步较晚,但是发展迅速,很多公司如雨后春笋一般进入这个行业,动物模型制作公司,这也造成来这个行业良莠不齐,如何选择一个---的医学实验外包公司就变得尤为重要。寻找---的实验外包公司,就像是寻觅一个合适的伴侣,可遇不可求,需要磨合。

2---运动睡眠剥夺法
此类睡眠剥夺方法形式多样,在脑电监护情况下可行全部的睡眠剥夺和选择性的睡眠剥夺。其共同特点是通过动力装置迫使大鼠---地运动,从而达到睡眠剥夺的目的。此类方法的优点是睡眠剥夺效果明显,睡眠剥夺的时间及强度易于掌握,重复性好,无须实验人员随时观察实验情况,减轻了实验人员工作强度。缺点是长时间运动引起机体的一系列应激反应可能干扰睡眠剥夺的实验结果,现选取其中两种有代表意义的方法介绍如下
2.1水平转盘睡眠剥夺法
此方法应用广泛,于 1983 年先应用在睡眠剥夺实验中,实验装置由一个电脑控制台、一个水平转盘及两个开放的长方形有机玻璃缸组成,转盘直径为 46 cm,在电脑控制下可以按顺时针逆时针方向随机水平转动! 两只有机玻璃缸的尺寸均为长60 cm ,宽20.5 cm,高 60 cm 。在距离缸底 5 cm 处的缸侧壁开有一条缝隙,使转盘的一半能分别从缝隙伸入两只玻璃缸中并能随意转动。缸底留置水约 2 cm 深,转盘离水面约3 cm 实验前1周将睡眠剥夺大鼠头颈部植入微电极 并将微电极与电脑控制台相连,将大鼠放在转盘上适应环境1周,每天约1 h让大鼠习惯在转盘上活动,进水,进食等。实验时将实验组的大鼠及对照组的大鼠分别置于两只缸中的转盘上,当电脑通过微电极监测到实验组大鼠进入慢波或快波睡眠的脑电信号后,立即发出指令使转盘转动 6 s(6 s内转动 1/3 圈),动物模型,当大鼠被转到玻璃缸壁时,因被玻璃缸壁挡住而可能掉入水中,每次在实验组睡眠剥夺大鼠进入睡眠时转盘即转动 6 s,方向随机,动物实验,转盘转动时两只大鼠均被动地随着转盘移动。此方法一次只剥夺一只大鼠睡眠,当实验组的睡眠剥夺大鼠在活动、进水、进食时转盘并不转动而此时对照组的大鼠则可趁机睡觉以弥补被剥夺的睡眠。此方法中睡眠剥夺组大鼠与对照组大鼠条件极其相似,因而可减少因实验条件不同而所致的应激反应。

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