药xiao学实验----功能的动物试验评价方法
1 测试项目
1.1 原理
这种方法是用高热量食物---动物肥胖，然后给试验样品（肥胖模型），或者同时给高热量食物给试验样品（肥胖预防模型），观察其变化动物体重和体脂含量。
1.2 肥胖模型法
spf级雄性大鼠，体重180-220g，8-12只/组。在屏障系统下，给大鼠喂养维持饲料并观察5-7天。按体重随机分为两组，10只给予维持饲料作为空白对照组，60只给予高热量模型饲料。每周记录喂食量、洒食量、剩食量，称体重1次。喂养2周后，将给予高热量饲料的60只大鼠按体重增加进行排序，剔除1/3体重增加较低的抗肥胖大鼠。选取40只肥胖敏感大鼠给予高热量饲料6周，空白对照组同时给予维持饲料。
2 测试原理
2.1 动物实验和人体食品试验所列指标为强制性项目。
2.2 在动物实验中，选择大鼠肥胖模型法和大鼠肥胖预防模型法中的一种。
2.3 减少体内多余的脂肪不仅仅是---。
2.4 引起---或抑制食欲的试验样品不能作为---功能食品。
2.5 每日的营养摄入量应基本---机体正常生命活动的需要。
2.6 对---无明显损害。
2.7 同一批试验样品在实验前应进行------检测。
2.9 对于不替代主食的---功能试验，应观察试验前后受试者的饮食和运动情况。
2.10 代主食---功能试验，除执行不代主食的设计指标外，还应设置体力活动、情绪、工作能力等测量表，排除有服用测试样品后无相应的fu面影响。结合替代主食的测试样品配方，对每日膳食进行了营养评估。
2.11 进行人体食品试验时，应进一步观察被检样品的食品安全性。
一、主要试剂材料
细胞自噬染色检测试剂盒(mdc法)（solarbio，g0170）
dmem（hyclone，sh30023）
fbs（hyclone，sh30070.03）
青链mei素（hyclone，---前动物实验，sv30010）
胰酶（hyclone，sh30042.01）
pbs（南京生兴，sn331）
co2培养箱（thermo fisher，3131）
confocal荧光显微镜（zeiss，动物实验室，lsm710）
二、实验方案
1、mg63及其耐药株培养在含10%胎牛xue清的dmem完全培养基中培养，培养在37℃含5%co2的细胞培养箱中培养，当---至80%-90%时，用胰酶将细胞---下来，按照1:3比例传代。
2、将1×106个细胞种在3.5cm玻璃底培养皿中，将细胞放入培养箱中培养过夜后，分别加入mir-22、cisp1atin、cisp1atin和mir-22后，陕西动物实验，将细胞放入培养箱中培养12h、24h。3、将细胞从培养箱中取出，去除培养基，用300～400μl的1×wash buffer清洗细胞1次，弃上清。4、加入适量mdc stain，可以做动物实验的公司，轻轻混匀。5、室温避光染色15～45min。6、用300～400μl的1×wash buffer清洗细胞2次，弃上清。7、加入100μl的collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。8、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，拍照。
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