新疆pcr-英瀚斯生物科技公司-荧光定量pcr

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    2023-5-31

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二、使用说明

1、装载探针

对于---时间较短(通常为2小时以内)的细胞,荧光定量pcr,先装载探针,后用活性氧阳性对照及自己感兴趣的---细胞。对于细胞---

时间较长(通常为6小时以上)的细胞,先用活性氧阳性对照及自己感兴趣的---细胞,后装载探针。

原位装载探针:本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1:1000用无培养液稀释dcfh-da,pcr实验室,使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液,实时定量pcr,加入适当体积稀释好的dcfh-da。加入的体积以能充分盖住细胞为宜,通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的dcfh-da的体积为1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的dcfh-da。




线粒体测序

线粒体是真核生物的重要细胞器,是生物体的能量工厂,参与能量代谢、信号转导、细胞凋亡等许多生命活动,对生物的生理活动起着---的作用。大部分线粒体基因由于其母系遗传特性以及进化速率较快等特点,被广泛地用于种群遗传学、进化生物学、谱系地理学和系统发育学、---诊断等学科领域。线粒体全基因组在生物进化的研究中具有的优势。由于线粒体有着与真核生物长期共生的进化历史,因此其基因组包含了反映物种进化的关键信息,同时,相对于核基因组,线粒体基因组小,容易对大量物种进行横向的比较分析,新疆pcr,有利于生物进化的研究,因而受到进化生物学家的---。线粒体的组成可以从两个层面上反映物种及群体的遗传和进化,即---序列组成和基因组的结构特征,两者的特征具有不同的进化机制和进化速度,在进化生物学研究中可以---的互补。







聚合酶链式反应(pcr)

操作步骤

1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

1qpcr buffer

5 μl

dntp mix( 2mm )

4 μl

引物1(10pm)

μl 2

引物2 ( 10pm)

2μl

taq酶(2u/ul)

1 μl

dna模板( 50ng-1μg/μl )

1 μl

加ddh2o至

μl 50

视pcr仪有无热盖,不加或添加石蜡油。

2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置pcr仪上执行扩增。-般:在93°c

预变性3-5min ,进入循环扩增阶段: 93°c 40s***58°c 30s***72°c 60s ,循环30-35

次,后在72°c保温7min。

3.结束反应, pcr产物放置于4°c待电泳检测或-20°c长期保存。

4. pcr的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100ul进行抽提反应混合液,以

除去石蜡油;否则,直接取5- 10μl电泳检测。





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