str检测
短串联重复(short tandem repeats, str),又称微wei星dna(microsatellite dna)或简单重复序列(--- repeat sequence, srs或ssr),是广泛存在于原核生物和真核生物基因组中的核苷酸重复序列。有丝分裂过程中dna链之间的错配引起的fu制滑动被认为是导致str产生的较为常见原因,并且依据不同fu制单元大小的不同以及不同物种之间,fu制滑动发生的概率也不相同。
str是以序列 (core repeat units) 首尾相连多次重复形成。每个str的序列结构相同,长度为2-6bp,但其重复单位数目和重复区域的长度不同,因此str在不同种族、不同人群之间的分布具有差---,构成了str遗传多态性。不同个体之间在一个同源str位点的重复次数也不同,因而同指纹识别一样,str位点分析也可对个体进行身份识别。通过识别个体基因组在特定位点的特定序列重复,即可创建其基因档案。基于此,str分析法已经成为一种重要的鉴定分析方法,荧光定量pcr,应用于---学、qin子鉴定及细胞鉴定等领域。
rna提取
1.弃去培养液,用pbs清洗两次1-2。
2.弃去pbs,用1000u1吸干净残余pbs。
3.加1ml trizol研磨b 41。
4. 1.5miep管标号与每孔相对应备用。
5.研磨好的溶液转移至对应的 ep管。
6.往每个ep管中加入250ul,剧烈震荡30s, 冰上静置12min[问l。
7. 所有样品4c离心,转速: 13500转1分钟,时间: 15min.
8. 再次标记一批同样编号ep管。
9.离心后吸上清液400u1移入相应编号的ep管中,再加入400ul异充
分混匀。4c冰箱35min。
10. 4c离心,转速: 13500转1分钟,时间: 10min.
11.弃去.上清液,pcr,加1m175%---,轻摇7]。
12. 4c离心,10600转/分钟,时间: 5min.
13. 弃上清液滤纸吸干。
14. 加depc水10ul溶解,-80c保存。进行逆转录前测浓度。
组织rna提取
1、剪米粒大小组织块放入ep管中标号。
2、ep管中加300ul trizol浸泡30分钟或更久。
3、用研磨棒研磨,以肉眼很难看到组织为宜。
4、加700u1 trizol静 置5分钟。
通常活性氧阳性对照在---细胞20-30分钟后可以---提高活性氧水平。
收集细胞后装载探针:按照1:1000用无培养液稀释dcfh-da,使终浓度为10微摩尔/升。细胞收集后悬浮于稀释好的dcfh-da中,细胞浓度为一百万至二千万/毫升,37℃细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触。用无细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的dcfh-da。直接用活性氧阳性对照及自己感兴趣的---细胞,pcr,或把细胞等分成若干份后---细胞。通常活性氧阳性对照在---细胞20-30分钟后可以---提高活性氧水平。
2.、检测
对于原位装载探针的样品可以用激光共---显微镜直接观察,或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光或流式细胞仪检测。
对于收集细胞后装载探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光或流式细胞仪检测,用激光共---显微镜直接观察也可以。
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